公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

     b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

l-Myc： Myc基因肺癌相關(guān)蛋白抗體 SK-BR-3細(xì)胞，腺癌細(xì)胞 人食管癌細(xì)胞,TE-1細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1

VNN1 Others Mouse 小鼠 VNN1 / Vanin-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大鼠無翅型MMTV整合位點家族成員3A(W3A)ELISA試劑盒 HSF1(Mouse Heat Shock Factor 1)  小鼠熱休克因子1 96T

Megalin： 糖蛋白gp330抗體 人口腔角質(zhì)細(xì)胞cDNAHOK cDNA

PC9人肺癌細(xì)胞 PC9 human lung cancer cells DMEM+10% FBS 大鼠無翅型MMTV整合位點家族成員3(W3)ELISA試劑盒 VEGFR-3/Flt-4(Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 2)  人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體3 96T

phospho-MyoD1(Ser200)： 0酸化肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體 CPE Others Human 人 CPE 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

Neuro-2a/N2a(小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragme (aa 367-606) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 人促紅細(xì)胞生成素抗體(EPO-Ab)ELISA試劑盒 IL-16(Interleukin-16) 白介素16抗原 0.5mg

HPV16 E7： 人瘤病毒16型E7抗體 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞MM

CXCL11 Protein Human 重組人 I-TAC / CXCL11 蛋白 人雌酮E(ESONE)ELISA 試劑盒 IL-16/LCF(interleukin-16)(Lymphocyte Chemotactic Factor) 白細(xì)胞介素-16抗原 0.5mg

HPV58 E6： 人類狀瘤病毒58 E6蛋白抗體 CHST11 Others Human 人 CHST11 / C4ST-1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 人雌三醇(E3)ELISA 試劑盒 IL-18/IGIF(Interleukin-18) 白細(xì)胞介素-18/干擾素γ誘導(dǎo)因子 0.5mg

K562人慢性骨髓性白血病細(xì)胞系RNF131： 環(huán)指蛋白131抗體 TGFB1 Others Rat 大鼠 TGF-beta 1 / TGFB1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

NCI-H661 人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA 試劑盒 Human Cortisol  人唾液96T

Phospholipase A2 activator protein： 0脂酶A2激活蛋白抗體 CHOdhfr細(xì)胞，二氫缺陷型中國倉鼠卵巢細(xì)胞 人癌細(xì)胞系,1590細(xì)胞 人星形膠質(zhì)細(xì)胞裂解物HAL

ACE2 Others Rat 大鼠 ACE2 / ACEH 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大鼠蛋白激酶A(PKA)ELISA 試劑盒 E2(Human Estradiol)  人雌二醇 96T

thymidine phosphorylase： 胸苷0酸化酶抗體 豬腎細(xì)胞;PK(15)