公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

     b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

MEF2D： 肌細(xì)胞特異性增強(qiáng)因子2D抗體 KM小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤瘤株;LⅡ

IL1A Protein Mouse 重組小鼠 IL-1 alpha / IL1A / IL1F1 蛋白 大鼠(PP)ELISA試劑盒 VEGF(Human Vascular Endothelial cell Growth Factor)  人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子 96T

phospho-MAP4K4(Ser801)： 0酸化原活化蛋白激酶MAP4K4抗體 LCN2 Others Rat 大鼠 LCN2 / NGAL 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

小鼠頜下腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠(PG)ELISA試劑盒 LTE4  大鼠白三烯E4 96T

Phospho-MARCKS(Ser170)： 0酸化蛋白激酶C底物Marcks抗體 TE-1細(xì)胞，食管癌細(xì)胞 人食管癌細(xì)胞,EC97076細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-C

EDA2R Others Mouse 小鼠 XEDAR / EDA2R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 人成纖維細(xì)胞生長因子受體4(FGFR4)ELISA試劑盒 IL-7Ra/CD127 peptide 白細(xì)胞介素-7受體a抗原 0.5mg

Islet-1+2： 胰島素基因增強(qiáng)結(jié)合蛋白1/2抗體 CM-R087大鼠軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

D341Med細(xì)胞，人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 藤黃微球菌/騰黃八疊球菌 貓腎細(xì)胞;CRFK 人成纖維細(xì)胞生長因子23(FGF-23)ELISA 試劑盒 ING1/p33(inhibitor of growth gene 1) 生長抑制因子基因1抗原 0.5mg

Phospho-IRAK1 (Ser376)： 0酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體 GFRA2 Others Mouse 小鼠 GFRA2 / GFRα2 / GDNFRB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

小鼠黑色素瘤瘤株;B16 人成熟促進(jìn)因子(MPF)ELISA 試劑盒 Inhibin Alpha 抑制素α抗原 0.5mg

KASUMI-1人紅白血病細(xì)胞PDPK1： 30酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體 IGFBP4 Others Human 人 IGFBP4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人臍動脈平滑肌細(xì)胞RNAHUASMC miRNA5 μg 大鼠乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)ELISA試劑盒 HCG(Human Chorionic Gonadotrophin)  人絨毛膜 96T

Phospho-PDPK1(Tyr373 + Tyr376)： 0酸化30酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體 非洲綠猴腎細(xì)胞;CV-1

人胚胎，皮膚，肌肉;M-20 人外周血白細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA試劑盒 Beta-CG(Human Chorionic Gonadotrophin Beta)  人絨毛膜β 96T

p53BP1： p53結(jié)合蛋白1抗體 氣管平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)