公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（

FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

細胞

3、細胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)

晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含 6ml 培養(yǎng)基的 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀用 6ml 培養(yǎng)基重懸，接種 25cm2培養(yǎng)瓶，于 37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

收到細胞后如何操作:

1、首先，觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請及時與我司技術(shù)支持聯(lián)系。

2、用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)，隔天再取出進行觀察。

3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等。

4、可將培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管中，備用；細胞傳代時，可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合使用，讓細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

5、確認細胞狀態(tài)良好后，應(yīng)及時將細胞凍存，再進行后續(xù)的實驗，避免后期實驗失誤可能發(fā)生細胞污染或死亡而導(dǎo)致的細胞丟失。

6、建議客戶收到細胞后前3天，100X、200X、400X各拍3-5張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我們技術(shù)支持溝通交流。

細胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

     b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

公司正在出售的產(chǎn)品：

Leupaxin： 樁蛋白抗體 小鼠胚胎成纖維細胞;NIH/3T3

B16-F10(小鼠皮膚黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 人小神經(jīng)膠質(zhì)細胞HM 大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1(AIL-R1)ELISA 試劑盒 Biotin/HRP 辣根過氧化物酶標記 0.1ml

LRPAP1： 脂蛋白受體相關(guān)蛋白/低密度脂蛋白相關(guān)蛋白的相關(guān)蛋白1抗體 CL-0065CoC1/DDP(人卵巢耐藥細胞亞株)5×106cells/瓶×2

FGF17 Protein Human 重組人 FGF17 蛋白 大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(AIL)ELISA試劑盒 Bovine IgG (親和化) IgG 10mg

LEPREL2： 皮屑樣蛋白2抗體 ALDH4A1 Others Human 人 ALDH4A1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

HPV33 E6： 人類狀瘤病毒33 E6蛋白抗體 人正常肺上皮細胞;BEAS-2B

COS-7(非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0182P815(小鼠肥大細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2 正常大鼠腎細胞;NRK 人可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA 試劑盒 Immunoglobuin binding protein-1(CD79A)IGBP-1 免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1 0.5mg

HEXB chain A： Beta基己糖苷酶beta亞基蛋白A鏈抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0902

PA-1(人卵巢腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 人可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA 試劑盒 CD133 造血干細胞抗原CD133 0.5mg

phospho-HSP70 (Tyr611)： 0酸化熱休克蛋白-70抗體 PKM Others Mouse 小鼠 PKM2 / OIP3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

A431(A-431)人表皮癌細胞人皮膚黑色素瘤細胞;SK-MEL-1 大鼠解整合素金屬蛋白酶10(ADAM10)ELISA試劑盒 SAA(Mouse Serum amyloid A) 小鼠血清淀粉樣蛋白A 96T

SCA14： 蛋白激酶C亞型G抗體 家貓腎細胞;CATK1

人絨毛間葉成纖維細胞(HVT)( 5×105 ) MCF-7(MCF7)(ATCC來源), 人癌細胞 Human 大鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CF)ELISA試劑盒 ACA(Mouse anti-centrol and centrosome antibody) 小鼠抗中性粒/中心體抗體 人心肌細胞-總RNAHCM-a NA

CD70 Protein Rat 重組大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 標簽) 大鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CF)ELISA 試劑盒 6-K-PG  大鼠6酮前列腺素 96T

Phospho-PKC gamma (Thr674)： 0酸化蛋白激酶C亞型G抗體 HDAC8 Others Human 人 HDAC8 / HDACL1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。