公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

二、細胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

     b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

NCI-H23(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 Pt K1 (NBL-3)(長鼻袋鼠腎細胞) 大鼠性別決定區(qū)Y框蛋白2(SOX2)ELISA試劑盒 PLAUR/uPAR (Rabbit Urokinase-type Plasminogen Activator Receptor)  兔型纖溶酶原激活物受體 96T

Myosin VIIa： 肌球蛋白7a/常染色體隱性耳聾蛋白2抗體 兔源細胞

IL11RA Protein Canine 重組狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 蛋白 (His 標簽) 大鼠型乙酰受體(N-AChR)ELISA試劑盒 ACE I  大鼠血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶 96T

MBC1： 膀胱癌突變蛋白1抗體 ACOX1 Others Human 人 ACOX1 / aox 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠型乙酰受體(N-AChR)ELISA 試劑盒 uPA (Rabbit urokinase plasminogen activator)  兔型纖溶酶原激活物 96T

大耳山羊肺細胞;LDG-1 人富含半胱酸蛋白61(Cyr61)ELISA試劑盒 sFRP-4(Secreted frizzled-related protein 4; Frizzled protein, human endometrium) 抗子宮內(nèi)膜抗原 0.5mg

HDHD1A： 鹵酸脫鹵酶樣水解酶域內(nèi)含蛋白1A抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞(彝族);HYL

LoVo(人大腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2 人 EDNRB / Endothelin B Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) 人副腫瘤性天皰瘡抗體(PNP)ELISA 試劑盒 Endostatin 內(nèi)皮抑素/內(nèi)皮他丁抗原 0.5mg

HECTD1： E3連接酶抑制素受體抗體 纖維粘連蛋白-牛源BPF

CCL4 Protein Human 重組人 CCL4 / MIP1B 蛋白 (His 標簽) 人副甲狀旁腺激素相關(guān)肽(PTHrp)ELISA 試劑盒 E.coli O6 (Escherichia coli O6) E.coli O6大腸桿菌菌體蛋白 0.5mg

HK-2人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞95-D人高轉(zhuǎn)移肺癌細胞 Human high metastatic lung cancer cell line 95-D RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA 試劑盒 Free-T3  大鼠游離狀腺原酸 96T

PTPRN： 蛋白酪酸0酸酶樣N前體蛋白抗體 KLK13 Others Human 人 KLK13 / Kallikrein-13 人細胞裂解液 (陽性對照)

人癌細胞;SK-BR-3 大鼠分泌型0脂酶A2(sPLA2)ELISA試劑盒 HCV-IgG(Human Hepatitis C virus IgG)  人丙型肝炎IgG 96T

PSMD12： 26S蛋白酶調(diào)節(jié)亞型p55抗體 黃牛皮膚細胞;BTA-S2

293來源病毒包裝細胞;ΦA-GP 人成纖維細胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠分泌型卷曲相關(guān)蛋白5(SFRP5)ELISA試劑盒 NN-T4  大鼠新生甲狀腺素 96T