公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

     b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

phospho-MAP1LC3A(Ser12)： 0酸化自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體 A-431細(xì)胞，表皮癌細(xì)胞 人耐VCR胃腺癌細(xì)胞,SGC-7901/VCR細(xì)胞 豬小腸上皮細(xì)胞;ZYM-DIEC02

CD8B Others Human 人 CD8B / P37 / LEU2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大鼠天門冬酸基轉(zhuǎn)移酶(AST)ELISA試劑盒 MCP-4/CCL13  大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4 96T

MUC5B： 粘蛋白-5B抗體 人腦膜細(xì)胞裂解物HMCL

marc-145猴胚胎腎上皮細(xì)胞 Marc-145 monkey embryonic kidney epithelial cells DMEM+10% FBS 大鼠天門冬酸基轉(zhuǎn)移酶(AST)ELISA試劑盒 Collagenase I(Mouse Collagenase Type I)  小鼠膠原酶I 96T

mucin3： 粘蛋白-3抗體 SERPINF1 Others Mouse 小鼠 SerpinF1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

Integrin alpha 2b/CD41： 血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗體 CM-H111人成骨細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

P388D1細(xì)胞，小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞 艱難梭菌Closidium difficile 非洲綠猴腎細(xì)胞;BS-C-1 人白細(xì)胞介素22(IL-22)ELISA試劑盒 MLN(Motilin)peptide 胃動素多肽 0.5mg

IL-17RC/IL-17RL： 白介素17受體C抗體 TNFRSF4 Others Human 人 TNFRSF4 / CD134 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW620 [SW 620;SW-620] 人白細(xì)胞介素-2(IL-2)ELISA試劑盒 mTOR(Mammalian target of rapamycin) 雷帕靶蛋白 0.5mg

IGSF8： 免疫球蛋超家族成員8抗體 人癌細(xì)胞;MDA-MB-231

LS174T人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞Eca-109 人食管癌細(xì)胞 大鼠成纖維細(xì)胞生長因子9(FGF9)ELISA試劑盒 GLUT1(Human Glucose transporter 1)  人葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1 96T

phospho-RPS6KA1(Thr348)： 0酸化0酸化絲酸/蘇酸激酶p90RSK蛋白抗體 HEC-1B細(xì)胞，子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞,ISK(Ishikawa)細(xì)胞 人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞cDNAHPMEC cDNA

EREG Others Human 人 Epiregulin / EREG 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大鼠成纖維細(xì)胞生長因子8(FGF8)ELISA試劑盒 LDL(Human low density lipoprotein)  人低密度脂蛋白 96T

phospho-RPS6KA1(Ser363)： 0酸化絲酸/蘇酸激酶p90RSK蛋白抗體 大鼠胰腺外分泌腺細(xì)胞;AR42J

CL-0393NCI-H209(人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 大鼠成纖維細(xì)胞生長因子7(FGF7)ELISA試劑盒 AA(Human Arachidonic Acid)  人花生四烯酸 96T