公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

MYST1： 組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶MOF抗體 XCL1 Others Mouse 小鼠 XCL1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

大鼠表皮角化細胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠氧化酶(XOD)ELISA試劑盒 GlyCAM-1(Human glycosylation-dependent cell adhesion molecule-1)  人糖基化依賴的細胞黏附分子 96T

Mesothelioma： 間質(zhì)細胞蛋白抗體 lovo, 人結(jié)腸癌細胞 腹水瘤,SAC-IIB2細胞 NCI-H1563 [H1563](人胚肺細胞)

GPX7 Others Human 人 GPX7 / Glutathione Peroxidase 7 人細胞裂解液 (陽性對照) 大鼠氧化酶(XOD)ELISA試劑盒 FGF-10(Rat fibroblast growth factor-10,FGF-10 ) 大鼠成纖維細胞生長因子10 96T

MYL3： 肌球蛋白輕鏈3抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0923

hHBrk1： 微絲相關(guān)蛋白hHBrk1抗體 山羊皮膚成纖維樣細胞;DG-S1 胚腎細胞，AAV-293細胞 HP615細胞，615小鼠肺癌瘤株

BTLA Others Mouse 小鼠 BTLA 人細胞裂解液 (陽性對照) 人甲狀旁腺激素(PTH)ELISA 試劑盒 Beta-catenin/ Beta-cats β-連環(huán)蛋白抗原(β-β鏈接素) 0.5mg

HPCL2： 植烷酰羥化酶2抗體 CL-0303PATU8988(人胰腺癌細胞)5×106cells/瓶×2

3T3D細胞，人骨髓瘤細胞 嗜熱脂肪地芽孢桿菌 SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細胞;293T 人甲種胎兒球蛋白/人甲胎蛋白(AFP)ELISA 試劑盒 p- Beta catenin(p-beta Catenin(phosphor-Y142)) 0酸化β-連環(huán)蛋白抗原 0.5mg

H9N1 Neuraminidase： A型流感病毒H9N1神經(jīng)酸酶型抗體 HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Common magpie/Hong Kong/2256/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)

HEY A8人卵巢癌細胞人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染CHO細胞株;7WPS1 大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)ELISA試劑盒 PLGF  大鼠胎盤生長因子 96T

PPP4C： 0酸酯酶-2Ac抗體 豬腎細胞;PK(15)

小鼠星形膠質(zhì)細胞(MA)(5×105) CaEs-17, 人食管癌細胞株 Human 大鼠胱硫醚β合成酶(CBS)ELISA試劑盒 Human histone H2A-H2B-DNA autoantibody  人抗組蛋白(H2A-H2B)-DNA抗體 扁桃體上皮細胞培養(yǎng)基TEpiCM-prf

HGF Protein Mouse 重組小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白 大鼠冠蛋白1A(CORO1A)ELISA試劑盒 RANTES/CCL5  大鼠正常T細胞表達和分泌因子 96T

PPAR delta + beta： D型-過氧化酶活化增生受體抗體 SPARCL1 Others Mouse 小鼠 SPARCL1 / SPARC-like 1 人細胞裂解液 (陽性對照)