公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

一、商品介紹：

2、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過(guò)夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產(chǎn)品：

MIP4： 巨噬細(xì)胞炎癥蛋白18抗體 人低分化肺腺癌細(xì)胞;SK-LU-1

CLCF1 Protein Human 重組人 N1 / CLCF1 / CLC 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) 大鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白1(HABP1)ELISA試劑盒 omentin(Mouse omentin)  小鼠網(wǎng)膜素 96T

MITF： MITF相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體 IL17RB Others Human 人 IL17RB / IL-17 Receptor B 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

小鼠腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA試劑盒 GHRP-Ghrelin  大鼠生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin 96T

MTOR： 雷帕靶蛋白抗體 HO-8910細(xì)胞，卵巢癌細(xì)胞 人胃腺癌細(xì)胞,MCG803細(xì)胞 大耳山羊肺細(xì)胞;LDG-1

CCL20 Protein Mouse 重組小鼠 CCL20 / MIP-3 alpha 蛋白 (His 標(biāo)簽) 人鼻咽癌(NPC)ELISA 試劑盒 MGr1-Ag/37LRP(P37-kDa laminin receptor precursor) 層粘連蛋白受體1抗體 DPYS Others Human 人 DPYS / Dihydropyrimidinase 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人小腸粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 人鼻病毒(RhV)ELISA試劑盒 MGr1-Ag/37LRP(P37-kDa laminin receptor precursor)(CT) 層粘連蛋白受體1抗原(C端) 0.5mg

IGFBP3： 結(jié)合蛋白3抗體 非洲綠猴腎細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);COS-1 [COS1] 轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細(xì)胞，293細(xì)胞 QGY-7703(肝癌細(xì)胞)

TNFSF13 Others Mouse 小鼠 TNFSF13 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 人苯并-DNA(PAH-DNA)ELISA試劑盒 MK(Midkine) 中期因子/肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子抗原 0.5mg

IL-6R Beta/CD130/gp130： 白細(xì)胞介素6受體β抗體 CM-H135人脈絡(luò)膜微血管細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

LEC-1倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞phospho-c-Raf(Ser471)： 0酸化原癌基因c-Raf抗體 猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞;RF/6A

人胚腎上皮細(xì)胞系;KiMA 人直腸粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠雌三醇(E3)ELISA 試劑盒 17-KS(Human 17-ketosteroids)  人17-酮類 96T

phospho-c-Raf(Tyr341)： 0酸化原癌基因c-Raf抗體 冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 大鼠雌激素轉(zhuǎn)移酶(SULT1E1)ELISA試劑盒 17-OHCS(Human 17-Hydroxycorticosteroids)  人17羥皮質(zhì)類 96T

phospho-c-Raf(Thr269)： 0酸化原癌基因c-Raf抗體 FGFR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 FGFR1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。