公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

GH3(大鼠垂體瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠背脊髓神經(jīng)元MN-dsc 大鼠載脂蛋白A4(APOA4)ELISA試劑盒 Guinea Immunoglobulin G,IgG  豚鼠免疫球蛋白G 96T

LKB1： 蘇酸蛋白激酶LKB1抗體 CM-M025小鼠外周血白細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

IGFBP2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IGFBP2 蛋白 (His 標(biāo)簽) 大鼠載脂蛋白A2(apo-A2)ELISA試劑盒 FSH Poultry  FSH 禽類酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒 96T

LMP7： 低分子量蛋白7抗體 SPG21 Others Mouse 小鼠 SPG21 / ACP33 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠載脂蛋白A2(APOA2)ELISA試劑盒 LH Poultry  LH 禽類酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒 96T

小鼠成纖維細(xì)胞;φ2 人抗可溶性肝抗原抗體(SLA)ELISA 試劑盒 Beta-arrestin 1/2(beta-arrestin 1/2) β-抑制蛋白1/2抗原 0.5mg

HES1： 轉(zhuǎn)錄因子HES-1抗體 人胚肺二倍體細(xì)胞;HL

H9c2(2-1) (大鼠心肌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0344HAN(人羊膜細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 牛腎細(xì)胞;MDBK 人抗抗體(AsAb)ELISA 試劑盒 ARIP2B(Activin receptor 2B) 激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b抗體 人晶狀體上皮細(xì)胞RNAHLEpiC miRNA5 μg

RT4(人膀胱移行細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人抗菌肽(Attacin)ELISA 試劑盒 MTR-1A (Melatonin receptor-1A) 褪黑素受體(抗原) 0.5mg

HOMER3： HOMER3蛋白抗體 HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/3/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

D341 Med人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞人羊膜細(xì)胞;WISH 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶16(MMP16)ELISA試劑盒 FDP  大鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物 96T

PRRSV： 豬繁殖與呼吸綜合征/豬藍(lán)耳病病毒抗體 狗肺成纖維樣細(xì)胞;DogL1

大鼠條紋神經(jīng)元(RNs)(1×106) C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 Rattus 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶14(MMP-14)ELISA試劑盒 PCNA(Mouse proliferating cell nuclear antigen antibody) 小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體 人上皮細(xì)胞裂解物HMEpiCL

TNF Protein Human 重組人 TNF-alpha / TNFA 蛋白 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)ELISA試劑盒 TM  大鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白 96T

PPM1F： 鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶0酸酶抗體 TNK2 Others Human 人 ACK1 / TNK2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)